Un test d’immunogénicité ADA (anti-drug antibody) permet de détecter la présence d’anticorps anti-médicament produits par le système immunitaire d’un patient à la suite de l’administration d’une molécule biopharmaceutique. Ces anticorps peuvent affecter l’efficacité, la pharmacocinétique ou la sécurité d’un médicament, et entraîner des effets indésirables. La mesure des ADA guide ainsi les décisions concernant le développement des médicaments et répond aux exigences réglementaires. La conception de tests d’immunogénicité ADA sensibles, spécifiques et sélectifs est donc essentielle.
La stratégie de détection des anticorps anti-médicaments (ADA) en plusieurs niveaux
Les agences réglementaires préconisent une approche multi‑niveaux pour les tests d’immunogénicité ADA. Un test de dépistage sensible (screening assay), un test de confirmation, une caractérisation des échantillons positifs par titrage et une évaluation des anticorps neutralisants (NAb) sont recommandés.
Le test de dépistage (screening assay)
Le test de dépistage offre une grande sensibilité et détecte de faibles niveaux d’ADA de différentes classes (IgG, IgM, IgA, etc.). Il s’agit souvent de tests ELISA, ECL/MSD ou SPR.
Le cut point est fixé à un taux de faux positifs (FPR) d’environ 5 % pour éviter de manquer de vrais positifs. Pour la sensibilité cible, la FDA recommande au moins 100 ng/mL pour les essais d’immunogénicité ADA de dépistage et de confirmation.
Quant à la lecture, les échantillons dont le signal dépasse le cut point de dépistage sont considérés comme potentiellement positifs pour les ADA et passent au niveau de confirmation.
L’essai de dépistage doit également présenter une tolérance au médicament et une tolérance à la matrice suffisantes pour rester robuste en présence de thérapeutique circulante et d’échantillons cliniques complexes.
Le test de confirmation (confirmatory assay)
Le test de confirmation démontre que le signal observé au screening est bien dû à des anticorps spécifiques du médicament et non à une liaison non spécifique.
Le principe repose sur une inhibition compétitive, où un excès de médicament non marqué est ajouté pour entrer en compétition avec le médicament marqué pour la liaison aux ADA.
- Cut point : généralement fixé à un FPR d’environ 1 % (99e percentile) pour minimiser les faux positifs.
- Lecture : les échantillons montrant une inhibition supérieure au cut point de confirmation sont considérés comme ADA positifs confirmés.
Cette étape est essentielle pour les dossiers réglementaires. Elle permet de séparer les signaux d’immunogénicité du bruit de l’essai ou des effets de matrice.
Le test de titrage (titration assay)
Une fois le test de confirmation effectué, un essai de titrage fournit une estimation semi‑quantitative du niveau d’anticorps dans chaque échantillon. Des dilutions en série des échantillons positifs confirmés sont réalisées. À chaque dilution, le signal est mesuré. Un seuil de signal, défini lors de la validation de la méthode, permet de déterminer le titre, qui correspond à la dilution pour laquelle le signal est égal à ce seuil.
- Cut point de titrage (TCP) déterminé lors de la validation.
- Valeur de titrage : dilution interpolée pour laquelle le signal est égal au cut point de titrage.
Les données de titrage soutiennent les analyses exposition–réponse, l’évaluation des risques et les discussions d’étiquetage avec les autorités de santé.
Le test de détection des anticorps neutralisants (NAbs)
La détection des NAbs (neutralizing antibodies) évalue si les ADA neutralisent l’activité biologique du thérapeutique, ce qui peut impacter l’efficacité ou la sécurité.
Ils sont réalisés sur les échantillons ADA positifs confirmés et peuvent être cellulaires (lecture fonctionnelle) ou en liaison (par exemple inhibition compétitive de l’interaction médicament–cible).
Tous les programmes ne nécessitent pas d’étape de confirmation séparée pour les NAbs, beaucoup suivent une stratégie de dépistage NAb en un seul niveau.
Les différents formats de tests d’immunogénicité ADA
Il existe plusieurs plateformes analytiques pouvant être utilisées pour mettre en œuvre une stratégie de mesure des anticorps anti-médicament (ADA). Le choix dépend de la molécule, de la sensibilité requise, de la tolérance au médicament et des infrastructures disponibles.
Bridging ELISA
Le bridging ELISA est le standard historique de l’industrie pour détecter et confirmer la présence des ADA. La protéine thérapeutique (le médicament) joue deux rôles.
- Capture : une forme du médicament est immobilisée sur la plaque ELISA.
- Détection : une forme du même médicament est marquée (HRP ou biotine + streptavidine‑enzyme).
Si l’échantillon contient des ADA, “le pont” entre les deux molécules de médicament permettent de générer un signal proportionnel à la quantité d’ADA présents.
Cette méthode détecte toutes les classes d’Ig sans la nécessité d’anticorps secondaires spécifiques d'espèces. Cependant, la sensibilité et la tolérance au médicament sont parfois inférieures à celles de l’ECL ou de la SPR. Le bridging ELISA représente néanmoins une option robuste et économique pour de nombreux programmes en début de développement.
ECL / MSD
Les essais en électrochimiluminescence (ECL) sur des plateformes telles que Meso Scale Discovery® (MSD) sont de plus en plus utilisés pour les ADA.
Le principe est similaire au bridging. La détection repose sur des marqueurs électrochimiluminescents lus sur un instrument MSD. Cette méthode présente plusieurs avantage :
- sensibilité et plage dynamique supérieures à celles de l’ELISA classique ;
- meilleure tolérance au médicament ;
- possibilités de multiplexage pour des stratégies multi‑domaines ou multi‑analytes.
Quelques limites sont à noter.
- Nécessité d’un accès à des instruments MSD et à des réactifs spécifiques.
- Développement et validation de la méthode pouvant être plus complexes que pour un ELISA standard.
L’ECL/MSD est privilégié pour les programmes en phase avancée, où la sensibilité et la tolérance au médicament sont critiques.
SPR (Biacore)
La résonance plasmonique de surface (SPR) sur des instruments tels que le Biacore peut être utilisée pour la détection et la caractérisation des ADA.
Il s’agit de la mesure en temps réel de la liaison entre le médicament immobilisé et les ADA en solution.
La SPR fournit des données cinétiques et d’affinité en plus de la présence ou l’absence d’ADA. Elle est utile pour la cartographie d’épitopes, la caractérisation d’anticorps anti‑idiotypiques et le dépannage d’essais.
Cependant, son débit est généralement plus faible que l’ELISA ou l’ECL pour de grands jeux d’échantillons cliniques. Elle nécessite un équipement et une expertise spécialisés.
La SPR est particulièrement utilisée pour le développement de méthodes, la caractérisation de réactifs et le support aux discussions réglementaires sur la performance des essais.
Agro‑Bio : analyses d’immunogénicité sur plateforme Biacore™ SPR
Agro‑Bio met sa plateforme Biacore™ SPR au service de vos projets d’immunogénicité. La détection ADA tous isotypes, la caractérisation des NAbs et les profils cinétiques (KD, ka, kd) se déroulent dans un cadre conforme aux attentes réglementaires (EMA, FDA, ICH).
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Les réactifs critiques pour le développement de tests d’immunogénicité ADA robustes
La performance de votre test d’immunogénicité ADA dépend de la qualité et de la pertinence des réactifs critiques utilisés lors du développement et de la validation.
Les contrôles positifs ADA / NAbs
Les anticorps anti-médicaments (ADA) et les anticorps neutralisants (NAbs) sont utilisés comme contrôles positifs (PC) dans les essais de dépistage, de confirmation, de titrage et détection des NAbs. Ils occupent différents rôles.
- Démontrer la sensibilité de l’essai et suivre la performance dans le temps.
- Soutenir la détermination des cut points et la validation (dépistage, confirmation, titrage, NAb).
- Servir de contrôles de convenance du système lors des tests d’échantillons en routine.
Agro‑Bio : ADA et NAbs polyclonaux pour vos contrôles positifs
Agro‑Bio développe des ADA et NAbs polyclonaux sur mesure dans plusieurs espèces. Ils sont adaptés à votre thérapeutique et à votre format d’essai et garantissent des contrôles positifs pertinents et robustes.
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Les anticorps anti‑idiotypiques
Les anticorps anti‑idiotypiques reconnaissent la région variable (idiotope) de votre thérapeutique et sont largement utilisés dans les essais d’immunogénicité et de PK.
Les applications sont multiples.
- Contrôles positifs de substitution lorsque des ADA issus de patients ne sont pas disponibles.
- Réactifs pour essais PK (capture / détection) et détection des NAbs (compétition avec l’interaction entre le médicament et la cible).
- Anticorps outils pour la cartographie d’épitopes, l’optimisation d’essais et la caractérisation.
Agro‑Bio conçoit et produit des anticorps anti‑idiotypiques polyclonaux et monoclonaux chez la souris, le rat, le lapin et d’autres espèces, avec une spécificité et un profil d’affinité définis.
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Bien choisir ses réactifs dès le début du développement de ses tests d’immunogénicité ADA
Le choix des contrôles ADA / NAbs et des réactifs anti‑idiotypiques appropriés dès le début du développement peut réduire le risque assay, raccourcir les délais et renforcer votre dossier réglementaire.
Nos scientifiques vous aident à définir la stratégie de réactifs la plus adaptée à votre programme.
Discutez de votre projet de test d’immunogénicité ADA.
FAQ
Qu’est ce qu’un anticorps anti-médicament (ADA) ?
ADA signifie anti‑drug antibody. Il s’agit d’un anticorps produit par le système immunitaire contre un biomédicament. Les ADA peuvent affecter la pharmacocinétique, l’efficacité et la sécurité du traitement. Ils sont donc surveillés pendant tout le développement clinique.
Quelle est la différence entre un test d’immunogénicité ADA et un dosage NAb ?
Un test de détection ADA répère les anticorps qui se lient au thérapeutique sans tenir compte de son effet fonctionnel. Un essai de détection des NAb (anticorps neutralisants) mesure spécifiquement les anticorps qui inhibent l’activité biologique du médicament. Tous les NAb sont des ADA, mais tous les ADA ne sont pas neutralisants. Les deux sont importants pour une évaluation complète de l’immunogénicité.
Comment choisir entre un format ELISA, ECL/MSD ou SPR (Biacore) pour mesurer les ADA ?
Le bridging ELISA est le format historique, robuste et économique, bien compris des régulateurs et adapté à de nombreux programmes en phases précoces. L’ECL/MSD offre une sensibilité et une tolérance au médicament supérieures, qui sont souvent privilégiées en phases avancées. La SPR (Biacore) permet une détection en temps réel et sans marquage avec des informations cinétiques (KD, ka, kd) utiles pour le développement de méthodes et la caractérisation de réactifs.
Pourquoi les contrôles positifs ADA/NAb sont‑ils indispensables dans les essais d’immunogénicité ?
Les contrôles positifs ADA et NAb servent à déterminer les cut points, à vérifier la sensibilité de l’essai et à suivre sa reproductibilité dans le temps et entre laboratoires. Leur utilisation est une exigence clé des guidances FDA et EMA pour valider les essais de dépistage, de confirmation et de titrage et soutenir les dossiers réglementaires.
Comment Agro‑Bio garantit‑il la qualité et la reproductibilité des contrôles positifs ADA/NAb ?
Agro‑Bio met en place un protocole avec une immunisation, une purification spécifique, puis une caractérisation complète (spécificité, affinité, capacité neutralisante). Les lots sont sécurisés et re‑testés périodiquement pour suivre leur stabilité et leur performance dans le temps. L’objectif est de fournir des contrôles positifs fiables et reproductibles pour vos essais et vos dossiers réglementaires.
Sources :
Immunogenicity Testing of Therapeutic Protein Products — Developing and Validating Assays for Anti‑Drug Antibody Detection. U.S. Food and Drug Administration (FDA), 2019.
Suh, Kyungah et al. “Approaches for the detection and analysis of antidrug antibodies to biopharmaceuticals: A review.” Journal of separation science vol. 45,12 (2022): 2077-2092. doi:10.1002/jssc.202200112
Liu, Tingting et al. “Development, Validation and Application of a Bridging ELISA for Detection of Antibodies against GQ1001 in Cynomolgus Monkey Serum.” Molecules (Basel, Switzerland) vol. 28,4 1684. 10 Feb. 2023, doi:10.3390/molecules28041684