Les procédés de bioproduction utilisent des cellules hôtes multiples (bactérie, levures, mammifère, insecte, plante) : ce système produit la protéine biothérapeutique d’intérêt mais également des protéines contaminantes issues de leur propre système d’expression.
Ces protéines contaminantes, appelées Host Cell Protein (HCP) sont des impuretés protéiques résiduelles qui peuvent potentiellement affecter la qualité et l’efficacité du biothérapeutique mais également la sécurité du patient.
Les autorités règlementaires exigent le suivi et le dosage de ces HCP avec une méthode de référence, l’ELISA sandwich.
Agro-Bio apporte une réponse globale autour des HCP pour les projets de bioproduction :
- Toutes les prestations sont réalisés au sein du groupe STAGO
- Agro-Bio est un expert indépendant, nous ne vendons ni kit générique HCP ni ne proposons des production GMP de biomolécules.
- Tous les anticorps, KIT ELISA,… développés sont la propriété exclusive de nos clients.
Le cycle d’utilisation d’un KIT ELISA HCP
Ce schéma issu de la guideline 1132 de la FDA, indique la stratégie à adopter à chaque étape du bioprocess en matière de monitoring des HCPs.
Pour quantifier les HCPs, il est d’usage d’utiliser un kit HCP générique au niveau des premières phases, cependant par la suite il faudra démontrer que le kit utilisé est adapté au process spécifique en testant les paramètres ELISA et en déterminant le pourcentage de Coverage de ces anticorps anti-HCP sur le mix HCP.
A partir de la Phase III il est fortement recommandé de développer un HCP ELISA kit process spécifique. Cette démarche permet de s’affranchir de problème de changement de lot avec les kit HCP ELISA génériques et, d’assurer une pérennité d’approvisionnement de lots d’anticorps anti-HCP qui pourront accompagner la production du bioproduit sur de longues périodes.
Des solutions optimisées pour la détection des host cell proteins (HCP)
Nous offrons une solution sur-mesure et complète pour vos problématiques HCP :
Sélection et qualification d’un kit générique HCP process-spécifique
Sélection et qualification des kits ELISA HCP génériques : dilution linéaire, spécificité, taux de coverage (recouvrement), LOD/LOQ
Chez Agro-Bio nous proposons deux techniques pour analyse COVERAGE (C.f HCP coverage évaluation)
Et, Agro-Bio ne propose pas à la vente des HCP ELISA KIT Generique, ce qui nous donne une totale indépendance dans les résultats et les sélections des HCP ELISA kit générique les plus adaptés.
Développement d’un KIT ELISA HCP process spécifique
- Production en bulk d’anticorps anti-HCP spécifiques (lapin, chèvre, poule) ou protocoles d’immunisation optimisés sur des animaux SPF (Specific-pathogen-free)
- Procédés de purification adaptés : sur protéines A/G versus par affinité (anticorps polyclonaux anti-HCP spécifiques)
- Validation des anticorps anti-HCP : analyse de coverage par western blot en gel 2D, 2D-DIBE, fractionnement d’immunoaffinité
- Développement et qualification (selon les directives ICH) de kit ELISA HCP spécifiques
- Conception et production de kits ELISA prêts à l’emploi et contrôle qualité.
Notre offre inclut également la sécurisation des sera et des anticorps produits ainsi que le suivi de la stabilité de ces réactifs critiques et des kit ELISA.
Analyse des HCP par Spectrométrie de masse.
Identifier les HCP présentes dans les échantillons
Les KIT ELISA HCP ne donnent qu’une quantification totale des HCP, par conséquent il est intéressant pour avoir une image complète du profil des HCP présentes dans le DSP, de pouvoir les identifier et avoir leurs quantités relatives.
Il est aussi particulièrement recommandé d’identifier les protéines HCP difficiles à supprimer tout au long du process de purification et les HCP résiduels présentes en fin de DSP.
La spectrométrie de masse comme méthode orthogonal peut être ici un outil essentiel. En effet, une fois que l'identité d'une HCP particulière est connue, son activité biologique potentielle ou son immunogénicité peuvent être évaluée.
Exemple de protocole : Nous pouvons séparer l’ensembles des protéine d’un échantillon HCP du client en 1 ou 2 dimensions. Et Après coloration (Bleu, argent…) et détermination des spots nous pouvons extraire les protéines d’intérêt. Ces protéine extraites seront digérées par des enzymes (Tryspsine, …) et analyser en masse (NanoLC-MS/MS,…) pour leur identification.
