Données de liaison en temps réel avec Biacore™ SPR : des principes à l'application

Biacore™ peut analyser un large éventail de molécules, notamment des anticorps, des protéines, des peptides, des acides nucléiques, des petites molécules, des ADC et même des protéines membranaires complexes. Grâce à sa haute sensibilité et à sa faible consommation d'échantillons, cette technologie fonctionne aussi bien avec des échantillons purifiés, des surnageants ou du sérum. Cette polyvalence rend Biacore™ adapté à des applications allant du criblage précoce à la découverte jusqu'aux études réglementées sur le développement de médicaments.

Oui. Biacore™ SPR est largement utilisé pour étudier les interactions antigène-anticorps lors du développement de vaccins. Il permet de cartographier les épitopes, d'évaluer la force de liaison et de cribler des bibliothèques d'anticorps ou de peptides afin d'identifier des candidats vaccins prometteurs. En surveillant la cinétique en temps réel, Biacore™ aide à valider les formulations, à optimiser les stratégies de dosage et à générer des données pouvant étayer les demandes d'autorisation réglementaires tant en phase préclinique que clinique.

Un sensorgramme est la représentation graphique d'un test Biacore™, montrant l'interaction entre un ligand immobilisé sur la puce du capteur et son analyte. La courbe ascendante représente la phase d'association, au cours de laquelle les molécules se lient, et la courbe descendante correspond à la dissociation, lorsque la liaison s'inverse. À partir de ces courbes, les constantes de vitesse d'association (ka) et de dissociation (kd) sont calculées et la constante de dissociation à l'équilibre (affinité, KD) est déterminée. Une interprétation correcte des sensorgrammes est essentielle pour différencier les liaisons fortes et stables des interactions faibles et transitoires.

La liaison au FcRn mesure l'interaction des anticorps avec le récepteur Fc néonatal à un pH de 6,0 et 7,4. Ces tests étudient la nature pH-dépendante de l'interaction, qui donne une indication de l'efficacité avec laquelle les anticorps sont recyclés au lieu d'être dégradés, et permettent de prédire les données initiales concernant la demi-vie du médicament i. La compréhension de la liaison au FcRn est essentielle dans le développement d'anticorps thérapeutiques, car elle guide les stratégies visant à prolonger la durée de circulation et à améliorer les schémas posologiques. La technologie SPR Biacore™ offre un moyen robuste et sans marquage d'étudier ces interactions dans des conditions physiologiques pertinentes.

La CFCA (Calibration-Free Concentration Analysis, analyse de concentration sans étalonnage) est une méthode Biacore™ permettant de déterminer la concentration active de molécules sans avoir recours à une courbe standard. Contrairement aux tests ELISA ou traditionnels, la CFCA mesure directement la liaison fonctionnelle, garantissant ainsi que seules les molécules biologiquement actives sont quantifiées. Elle nécessite très peu d'échantillon, fournit des résultats rapides et est hautement reproductible. Cela rend la CFCA particulièrement utile pour la comparabilité entre lots, les tests de contrôle qualité et les études de stabilité dans des conditions de stress.

Oui. La SPR permet la détection en temps réel et sans marquage des anticorps anti-médicaments (ADA) et des anticorps neutralisants (NAbs). Contrairement à l'ELISA, qui peut passer à côté des réponses à faible affinité ou IgG4, Biacore™ capture tous les événements de liaison dès qu'ils se produisent, même ceux qui sont transitoires. Cela augmente la sensibilité et réduit les faux négatifs. Par conséquent, la SPR est de plus en plus utilisée dans les tests d'immunogénicité afin de garantir la sécurité et l'efficacité des médicaments pendant les phases précliniques et cliniques.

La reproductibilité dépend d'une conception minutieuse des tests, d'une utilisation appropriée des surfaces de référence et d'un conditionnement optimal de la puce du capteur Biacore™. Des contrôles qualité rigoureux, tels que la surveillance de la dérive de la ligne de base, le contrôle des cycles de régénération et la normalisation des tampons, jouent également un rôle majeur. Travailler avec une CRO expérimentée comme Agro-Bio garantit que tous ces facteurs sont gérés de manière systématique, ce qui permet d'obtenir des résultats fiables et vérifiables qui répondent aux attentes réglementaires.

Oui. La SPR permet de suivre en temps réel les variations de conformation ou de stabilité des protéines, révélées par des modifications du sensorgramme.